Preview

Вестник Российской академии медицинских наук

Расширенный поиск

Рекомбинантный белок Тр0965 Treponema pallidum как кандидатный антиген для серологической диагностики сифилиса

https://doi.org/10.15690/vramn653

Полный текст:

Аннотация

Обоснование: Специфические (трепонемные) серологические тесты, основанные на поиске антител к антигенам T. pallidum, являются основным методом лабораторной диагностики сифилиса. В связи с невозможностью культивирования данного микроорганизма invitro, наиболее перспективным источником антигенов для проведения диагностических реакций являются рекомбинантные белки T. pallidum. Клонирование и оценка аналитических возможностей отдельных белков T. pallidum в перспективе может расширить спектр антигенов, предназначенных как для универсальной высокочувствительной и специфичной диагностики сифилиса, так и дифференциальной диагностики различных форм этого заболевания.

Цель исследования:Оценка аналитических возможностей (чувствительности и специфичности) рекомбинантного белка Tр0965 T. pallidum как кандидатного антигена для серологической диагностики сифилиса.

Методы: Экспрессионная система гена tp0965 T.pallidum штамм Nichols создана на основе вектора pET28a. Гибридной плазмидой трансформировали клетки штамма E. coli BL-21(DE3), после чего индукцию биосинтеза рекомбинантного белка вызывали добавлением изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозида. Выделение целевого белка из лизата бактериальной культуры проводили с использованием металл-хелатной хроматографии на сорбенте SepharoseNi-NTA. Очищенный рекомбинантный белок Тр0965 наносили на 96-луночные планшеты высокой сорбции, которые в дальнейшем использовали для твердофазного иммуноферментного анализа  сывороток крови пациентов с различными формами сифилиса в сравнении с группой здоровых доноров.

Результаты: Полученные результаты  свидетельствовали о высокой частоте положительных результатов ИФА сывороток крови больных сифилисом по сравнению с группой здоровых доноров. Чувствительность серологического исследования с использованием рекомбинантного белка Тр0965 составила 98,8%, специфичность – 87,5%. Наиболее высокие значения чувствительности (100%) зафиксированы в группах пациентов с первичным, вторичным и ранним скрытым сифилисом с некоторым снижением данного показателя до 95,2% в группе пациентов с поздним скрытым сифилисом.

Заключение: Полученные результаты позволяют рассматривать рекомбинантный белок Тр0965 T.pallidumв качестве перспективного антигена для совершенствования универсальных трепонемных тестов серологической диагностики сифилиса. 

Об авторах

Анастасия Владимировна Рунина
Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии, Москва
Россия

Научный сотрудник Отдела лабораторной диагностики инфекций, передающихся половым путем, и дерматозов. 

Адрес: 107076, Москва, ул. Короленко, д. 3, стр. 6,



Анастасия Сергеевна Старовойтова
Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова
Россия

Студент Факультета фундаментальной медицины. 

Адрес: 119991, Москва, ул. Ленинские Горы, д. 1



Дмитрий Геннадьевич Дерябин
Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии, Москва
Россия

Доктор медицинских наук, профессор, заведующий отделом лабораторной диагностики инфекций, передающихся половым путем, и дерматозов

Адрес: 107076, Москва, ул. Короленко, д. 3, стр. 6,



Алексей Алексеевич Кубанов
Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии, Москва
Россия

Доктор медицинских наук, профессор, заместитель директора по научной работе. 

Адрес: 107076, Москва, ул. Короленко, д. 3, стр. 6,



Список литературы

1. Brinkman MB, McKevitt M, McLoughlin M, et al. Reactivity of antibodies from syphilis patients to a protein array representing the Treponema pallidum proteome. J Clin Microbiol. 2006;44(3):888– 891. doi: 10.1128/JCM.44.3.888-891.2006.

2. Ratnam S. The laboratory diagnosis of syphilis. Can J Infect Dis Med Microbiol. 2005;16(1):45–51. doi: 10.1155/2005/597580.

3. Carlson JA, Dabiri G, Cribier B, Sell S. The immunopathobiology of syphilis: the manifestations and course of syphilis are determined by the level of delayed-type hypersensitivity. Am J Dermatopathol. 2011;33(5):433–460. doi: 10.1097/DAD.0b013e3181e8b587.

4. Соколовский Е., Фриго Н., Ротанов С., и др. Восточноевропейская система сексуального и репродуктивного здоровья. Руководство по лабораторной диагностике сифилиса в странах Восточной Европы // Вестник дерматологии и венерологии. — 2008. — №5. — С. 87—96. [Sokolovskii E, Frigo N, Rotanov S, et al. EE SRH Network. Guidelines for the laboratory diagnosis of syphilis in East-European countries. Vestn Dermatol Venerol. 2008;(5):87−96. (In Russ).]

5. Smith BC, Simpson Y, Morshed MG, et al. New proteins for a new perspective on syphilis diagnosis. J Clin Microbiol. 2013;51(1):105– 111. doi: 10.1128/JCM.01390-12.

6. Long FQ, Zhang JP, Shang GD, et al. Seroreactivity and immunogenicity of Tp0965, a hypothetical membrane protein of Treponema pallidum. Chin Med J (Engl). 2012;125(11):1920– 1924.

7. Castro R, Prieto ES, Santo I, et al. Evaluation of an enzyme immunoassay technique for detection of antibodies against Treponema pallidum. J Clin Microbiol. 2003;41(1):250-253. doi: 10.1128/jcm.41.1.250-253.2003.

8. Yu CS, Chen YC, Lu CH, Hwang JK. Prediction of protein subcellular localization. Proteins. 2006;64(3):643-651. doi: 10.1002/prot.21018.

9. Zhang RL, Zhang JP, Wang QQ. Recombinant Treponema pallidum protein Tp0965 activates endothelial cells and increases the permeability of endothelial cell monolayer. PLoS One. 2014;9(12):e115134. doi: 10.1371/journal.pone.0115134.

10. Хайруллин Р.Ф., Ротанов С.В., Фриго Н.В., Белоусова А.В. Биоинформатический анализ специфических антигенов T. pallidum // Вестник дерматологии и венерологии. —2012. — №5. — С. 56—64. [Khairullin R, Rotanov S, Frigo N, Belousova A. Bioinformatic analysis of T. pallidum specific antigens. Vestn Dermatol Venerol. 2012;(5):56−64. (In Russ).]

11. McGill MA, Edmondson DG, Carroll JA, et al. Characterization and serologic analysis of the Treponema pallidum proteome. Infect Immun. 2010;78(6):2631–2643. doi: 10.1128/IAI.00173-10.


Для цитирования:


Рунина А.В., Старовойтова А.С., Дерябин Д.Г., Кубанов А.А. Рекомбинантный белок Тр0965 Treponema pallidum как кандидатный антиген для серологической диагностики сифилиса. Вестник Российской академии медицинских наук. 2016;71(2):109-113. https://doi.org/10.15690/vramn653

For citation:


Runina A.V., Starovoitova A.S., Deryabin D.G., Kubanov A.A. Evaluation of the recombinant protein Tp0965 of Treponema pallidum as candidate antigen for serological diagnosis of syphilis. Annals of the Russian academy of medical sciences. 2016;71(2):109-113. (In Russ.) https://doi.org/10.15690/vramn653

Просмотров: 431


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 0869-6047 (Print)
ISSN 2414-3545 (Online)