Отправить статью по E-mail 
Рекомбинантный белок Тр0965 Treponema pallidum как кандидатный антиген для серологической диагностики сифилиса
- Авторы: Рунина А.В.1, Старовойтова А.С.2, Дерябин Д.Г.1, Кубанов А.А.1
-
Учреждения:
- Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии, Москва
- Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова
- Выпуск: Том 71, № 2 (2016)
- Страницы: 109-113
- Раздел: АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ МИКРОБИОЛОГИИ
- Дата публикации: 05.04.2016
- URL: https://vestnikramn.spr-journal.ru/jour/article/view/653
- DOI: https://doi.org/10.15690/vramn653
- ID: 653
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Обоснование: Специфические (трепонемные) серологические тесты, основанные на поиске антител к антигенам T. pallidum, являются основным методом лабораторной диагностики сифилиса. В связи с невозможностью культивирования данного микроорганизма invitro, наиболее перспективным источником антигенов для проведения диагностических реакций являются рекомбинантные белки T. pallidum. Клонирование и оценка аналитических возможностей отдельных белков T. pallidum в перспективе может расширить спектр антигенов, предназначенных как для универсальной высокочувствительной и специфичной диагностики сифилиса, так и дифференциальной диагностики различных форм этого заболевания.
Цель исследования:Оценка аналитических возможностей (чувствительности и специфичности) рекомбинантного белка Tр0965 T. pallidum как кандидатного антигена для серологической диагностики сифилиса.
Методы: Экспрессионная система гена tp0965 T.pallidum штамм Nichols создана на основе вектора pET28a. Гибридной плазмидой трансформировали клетки штамма E. coli BL-21(DE3), после чего индукцию биосинтеза рекомбинантного белка вызывали добавлением изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозида. Выделение целевого белка из лизата бактериальной культуры проводили с использованием металл-хелатной хроматографии на сорбенте SepharoseNi-NTA. Очищенный рекомбинантный белок Тр0965 наносили на 96-луночные планшеты высокой сорбции, которые в дальнейшем использовали для твердофазного иммуноферментного анализа сывороток крови пациентов с различными формами сифилиса в сравнении с группой здоровых доноров.
Результаты: Полученные результаты свидетельствовали о высокой частоте положительных результатов ИФА сывороток крови больных сифилисом по сравнению с группой здоровых доноров. Чувствительность серологического исследования с использованием рекомбинантного белка Тр0965 составила 98,8%, специфичность – 87,5%. Наиболее высокие значения чувствительности (100%) зафиксированы в группах пациентов с первичным, вторичным и ранним скрытым сифилисом с некоторым снижением данного показателя до 95,2% в группе пациентов с поздним скрытым сифилисом.
Заключение: Полученные результаты позволяют рассматривать рекомбинантный белок Тр0965 T.pallidumв качестве перспективного антигена для совершенствования универсальных трепонемных тестов серологической диагностики сифилиса.
Ключевые слова
Об авторах
Анастасия Владимировна Рунина
Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии, Москва
Email: bel4788@gmail.com
Научный сотрудник Отдела лабораторной диагностики инфекций, передающихся половым путем, и дерматозов.
Адрес: 107076, Москва, ул. Короленко, д. 3, стр. 6,
РоссияАнастасия Сергеевна Старовойтова
Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова
Email: starovoitova.anastasiya@mail.ru
Студент Факультета фундаментальной медицины.
Адрес: 119991, Москва, ул. Ленинские Горы, д. 1
РоссияДмитрий Геннадьевич Дерябин
Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии, Москва
Автор, ответственный за переписку.
Email: dgderyabin@yandex.ru
Доктор медицинских наук, профессор, заведующий отделом лабораторной диагностики инфекций, передающихся половым путем, и дерматозов
Адрес: 107076, Москва, ул. Короленко, д. 3, стр. 6,
РоссияАлексей Алексеевич Кубанов
Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии, Москва
Email: info@cnikvi.ru
Доктор медицинских наук, профессор, заместитель директора по научной работе.
Адрес: 107076, Москва, ул. Короленко, д. 3, стр. 6,
РоссияСписок литературы
- Brinkman MB, McKevitt M, McLoughlin M, et al. Reactivity of antibodies from syphilis patients to a protein array representing the Treponema pallidum proteome. J Clin Microbiol. 2006;44(3):888– 891. doi: 10.1128/JCM.44.3.888-891.2006.
- Ratnam S. The laboratory diagnosis of syphilis. Can J Infect Dis Med Microbiol. 2005;16(1):45–51. doi: 10.1155/2005/597580.
- Carlson JA, Dabiri G, Cribier B, Sell S. The immunopathobiology of syphilis: the manifestations and course of syphilis are determined by the level of delayed-type hypersensitivity. Am J Dermatopathol. 2011;33(5):433–460. doi: 10.1097/DAD.0b013e3181e8b587.
- Соколовский Е., Фриго Н., Ротанов С., и др. Восточноевропейская система сексуального и репродуктивного здоровья. Руководство по лабораторной диагностике сифилиса в странах Восточной Европы // Вестник дерматологии и венерологии. — 2008. — №5. — С. 87—96. [Sokolovskii E, Frigo N, Rotanov S, et al. EE SRH Network. Guidelines for the laboratory diagnosis of syphilis in East-European countries. Vestn Dermatol Venerol. 2008;(5):87−96. (In Russ).]
- Smith BC, Simpson Y, Morshed MG, et al. New proteins for a new perspective on syphilis diagnosis. J Clin Microbiol. 2013;51(1):105– 111. doi: 10.1128/JCM.01390-12.
- Long FQ, Zhang JP, Shang GD, et al. Seroreactivity and immunogenicity of Tp0965, a hypothetical membrane protein of Treponema pallidum. Chin Med J (Engl). 2012;125(11):1920– 1924.
- Castro R, Prieto ES, Santo I, et al. Evaluation of an enzyme immunoassay technique for detection of antibodies against Treponema pallidum. J Clin Microbiol. 2003;41(1):250-253. doi: 10.1128/jcm.41.1.250-253.2003.
- Yu CS, Chen YC, Lu CH, Hwang JK. Prediction of protein subcellular localization. Proteins. 2006;64(3):643-651. doi: 10.1002/prot.21018.
- Zhang RL, Zhang JP, Wang QQ. Recombinant Treponema pallidum protein Tp0965 activates endothelial cells and increases the permeability of endothelial cell monolayer. PLoS One. 2014;9(12):e115134. doi: 10.1371/journal.pone.0115134.
- Хайруллин Р.Ф., Ротанов С.В., Фриго Н.В., Белоусова А.В. Биоинформатический анализ специфических антигенов T. pallidum // Вестник дерматологии и венерологии. —2012. — №5. — С. 56—64. [Khairullin R, Rotanov S, Frigo N, Belousova A. Bioinformatic analysis of T. pallidum specific antigens. Vestn Dermatol Venerol. 2012;(5):56−64. (In Russ).]
- McGill MA, Edmondson DG, Carroll JA, et al. Characterization and serologic analysis of the Treponema pallidum proteome. Infect Immun. 2010;78(6):2631–2643. doi: 10.1128/IAI.00173-10.
Дополнительные файлы
