Исследование протективных свойств рекомбинантного комплекса белка F наружной мембраны и анатоксина Pseudomonas aeruginosa

Обложка


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Pseudomonas aeruginosa вызывает осложнения после ожогов, травм и хирургических вмешательств, являясь одной из основных причин нозокомиальных инфекций. Этот патоген обладает высокой резистентностью к большинству антибактериальных средств, поэтому иммунопрофилактика рассматриваться как один из приоритетных подходов для борьбы с синегнойной инфекцией. Цель исследования: Изучить защитные свойства рекомбинантного комплекса белка F наружной мембраны (OprF) и атоксической формы экзотоксина А (анатоксина) от экспериментальной синегнойной инфекции. Методы: Рекомбинантные белки, содержащие дополнительную шести гистидиновую последовательность, синтезировали в клетках Escherichia coli c помощью изопропил-b-d-тиогалактопиранозида (ИПТГ) и очищали методом аффинной хроматографии с использованием Ni-сефарозы. Препаратами рекомбинантных белков внутрибрюшинно иммунизировали мышей. В качестве адъюванта использовали гидроксид алюминия. Экспериментальное заражение осуществляли внутрибрюшинным введением живой вирулентной культуры P. aeruginosa штамма РА103. Результаты: При двукратной иммунизации мышей комплексом, содержащим 25 мкг OprF и 50 мкг анатоксина, выявлен наилучший протективный эффект (индекс эффективности защитных свойств в этом случае составил 4,0). Индексы эффективности для рекомбинантных белков, вводимых двукратно в тех же дозах по отдельности, соответствовали 2,0 для OprF и 2,3 для анатоксина и не увеличивались после трехкратной иммунизации животных. Уменьшенные в два раза доз (12,5 мкг OprF и 25 мкг анатоксина) при трехкратном введении способствовало увеличению выживаемости мышей иммунизированных отдельными белками (индексы эффективности: 3 для OprF и 3,5 для анатоксина), однако при введении комплекса белков в тех же дозах индекс эффективности не увеличивался и составил 2,8. Заключение: Показано, что максимальный протективный эффект формируется в короткие сроки при использовании комплексной иммунизации двумя рекомбинантными белками OprF и анатоксином в дозах 25 и 50 мкг.

Об авторах

Алексей Алексеевич Калошин

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Москва

Автор, ответственный за переписку.
Email: alex-k-1973@yandex.ru

кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории протективных антигенов

Россия

Евгения Игоревна Леонова

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Москва

Email: evgeniya-leonova@mail.ru

младший научный сотрудник лаборатории протективных антигенов 

Россия

Алена Владимировна Солдатенкова

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Москва

Email: lesic7@yandex.ru

научный сотрудник лаборатории протективных антигенов

Россия

Наталья Александровна Михайлова

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Москва

Email: n_michailova@inbox.ru

доктор медицинских наук, профессор, заведующая лабораторией протективных антигенов, заместитель директора по научной работе

Россия

Список литературы

  1. Falagas ME, Koletsi PK, Bliziotis IA. The diversity of definitions of multidrug-resistant (MDR) and pandrug-resistant (PDR) Acinetobacter baumannii and Pseudomonas aeruginosa. J Med Microbiol. 2006;55(12):1619–1629. doi: 10.1099/jmm.0.46747-0
  2. Strateva T, Yordanov D. Pseudomonas aeruginosa ― a phenomenon of bacterial resistance. J Med Microbiol. 2009;58(9):1133–1148. doi: 10.1099/jmm.0.009142-0.
  3. Бобровничий В.И. Современные подходы к диагностике и лечению синегнойной инфекции у больных муковисцидозом // Медицинский журнал. – 2012. – No1. – С. 4–9. [Bobrovnichii VI. Modern approaches to diagnosis and treatment of Pseudomonas aeruginosa infection in a patient with cystic fibrosis. Meditsinskii zhurnal. 2012;1:4–9. (In Russ).]
  4. Мороз А.Ф. Применение поливалентной вакцины с защитным эффектом против Pseudomonas aeruginosa / Сб. материалов Всесоюзной конференции по ранам и раневой инфекции. – М.; 1977. С. 73–74. [Moroz AF. Primenenie polivalentnoi vaktsiny s zashchitnym effektom protiv Pseudomonas aeruginosa. (Conference proceedings) Sb. materialov Vsesoyuznoi konferentsii po ranam i ranevoi infektsii. Moscow; 1977. p. 73–74. (In Russ).]
  5. Станиславский Е.С. и др. Бесклеточная псевдомонас-вакцина. Лабораторные испытания эффективности экспериментальных псевдомонас-вакцин // Журнaл микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. – 1982. – No10. – С. 25–29. [Stanislavskii ES, et al. Beskletochnaya psevdomonas-vaktsina. Laboratornye ispytaniya effektivnosti eksperimental’nykh psevdomonas-vaktsin. Zhurnal mikrobiologii, epidemiologii i immunologii. 1982;10:25–29. (In Russ).]
  6. Макаренко Т.А., Станиславский Е.С. Иммунологическое изучение белков клеточной стенки Pseudomonas aeruginosa // Журнaл микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. – 1996. – No2. – С. 7–9. [Makarenko TA, Stanislavskii ES. Immunologicheskoe izuchenie belkov kletochnoi stenki Pseudomonas aeruginosa. Zhurnal mikrobiologii, epidemiologii i immunologii. 1996;2:7–9. (In Russ).]
  7. Kim DK, Kim JJ, Kim JH, et al. Comparison of two immunization schedules for a Pseudomonas aeruginosa outer membrane proteins vaccine in burn patients. Vaccine. 2000;19(9–10):1274–1283. doi: 10.1016/S0264-410X(00)00235-8
  8. Krishnan S, Prasadarao NV. Outer membrane protein A and OprF ― Versatile roles in Gramnegative bacterial infections. FEBS Journal. 2012;279(6):919–931. doi: 10.1111/j.1742-4658.2012.08482.x.
  9. Калошин А.А., Гатыпова Е.В., Михайлова Н.А. Получение рекомбинантных форм белка F наружной мембраны (OprF) Pseudomonas aeruginosa и исследование их иммуногенных свойств // Биотехнология. – 2011. – No2. – С. 74–84. [Kaloshin AA, Gatypova EV, Mikhailova NA. Obtaining of Recombinant Forms of Outer Membrane Protein F from Pseudomonas aeruginosa and Assessment of their Immunogenic Properties. Biotekhnologiia (Mosc.). 2011;2:74–84. (In Russ).]
  10. Вертиев Ю.В., Бродвинова Н.С., Мороз A.Ф. Экзотоксин А Pseudomonas aeruginosa и его роль в патогенезе синегнойной инфекции // Журнал микробиологии эпидемиологии и иммунологии. – 1981. – No2. – С. 13–19. [Vertiev YV, Brodvinova NS, Moroz AF. Ekzotoksin A Pseudomonas aeruginosa i ego rol’ v patogeneze sinegnoinoi infektsii. Zhurnal mikrobiologii epidemiologii i immunologii. 1981;2:13–19. (In Russ).]
  11. Калошин А.А., Исаков М.А., Михайлова Н.А., Вертиев Ю.В. Получение рекомбинантной атоксической формы экзотоксина А Pseudomonas aeruginosa // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2012. – Т. 154. – No9. – С. 330–335. [Kaloshin AA, Isakov MA, Mikhailova NA, Vertiev JV. Preparation of Recombinant Atoxic Form of Exotoxin A from Pseudomonas Aeruginosa. Bull Exp Biol Med. 2013;154(3):346-350.] doi: 10.1007/ s10517-013-1947-1
  12. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. – Л.: Медицинская литература; 1962. 180 с. [Ashmarin IP, Vorob’ev AA. Statisticheskie metody v mikrobiologicheskikh issledovaniyakh. Leningrad: Meditsinskaya literatura; 1962. 180 p. (In Russ).]

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Издательство "Педиатръ", 2016



Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах