Воздействие цисплатина на мультипотентные мезенхимные стромальные клетки жировой ткани человека при различном уровне кислорода

Цель исследования: оценить повреждающее воздействие цисплатина на ММСК жировой ткани, находящиеся в фазе активной пролиферации и в состоянии монослоя, при стандартном (20%) и сниженном до 1% и 5% уровне кислорода в среде культивирования.

Методы: Оценку влияния цисплатина на ММСК проводили на культурах 2 пассажа в состоянии монослоя и в культурах в активной фазе роста. Профиль поверхностных маркеров ММСК определяли с помощью проточной цитофлуориметрии. Жизнеспособность ММСК после инкубации с цисплатином оценивали по количеству апоптотических и некротических клеток с помощью набора ANNEXIN V-FITC – PI (Immunotech, Франция). Стандартные условия культивирования (~20% О₂) создавали в СО₂-инкубаторе (Sanyo, Япония), 5% О₂ создавали используя мультигазовый инкубатор (Sanyo, Япония), 1% О₂ – используя герметичную камеру (Stemcell Technologies, США).

Результаты: Инкубация ММСК в состоянии монослоя с цисплатином в концентрации 10 мкг/мл в течение 72 часов вызывала гибель практически половины клеток в культуре как при 20% О₂, так и при 5% и 1% О₂ в среде. Во всех условиях культивирования увеличивалась доля PI⁺-клеток и PI⁺/Ann⁺-клеток. Более кратковременные экспозиции с цисплатином (24 и 48 часов) не оказывали выраженного повреждающего эффекта. Воздействие цисплатина на ММСК в активной фазе роста в течение 48 часов сопровождалось накоплением количества Ann⁺-клеток и PI⁺/Ann⁺-клеток. При этом наименьшее повреждающее воздействие цисплатин оказал на клетки, культивируемые в условиях гипоксии (1% О₂).

Заключение: Полученные данные свидетельствуют, что ММСК в состоянии монослоя погибают преимущественно путем некроза, тогда как для культур ММСК в фазе роста в ответ на воздействие было характерно накопление клеток, погибающих путем апоптоза, вне зависимости от уровня содержания кислорода в среде.