Objective: To evaluate the damaging effects of cisplatin on MMSCs from adipose tissue in a phase of active proliferation and the state of the monolayer, which was exposed at standard (20%) and reduced to 1% and 5% level of oxygen.
Methods: The incubation MMSC with cisplatin was performed on cultures of 2 passage in a state in monolayer and cultures in the active growth phase. Profile surface markers of MMSC determined by flow cytometry. MMSCs viability after incubation with cisplatin was detected by the number of apoptotic and necrotic cells using ANNEXIN V-FITC - PI Kit (Immunotech, France). Standard culture conditions (~ 20% O2) created in a CO2 incubator (Sanyo, Japan), 5% O2 created using multigas incubator (Sanyo, Japan), 1% O2 - using an airtight chamber (Stemcell Technologies, USA).
Results: Incubation of monolayer MMSC with cisplatin at a concentration of 10 ug/ml for 72 hours leads to death of half of the cells in culture under 20% O2, 5% O2 and 1% O2. Cisplatin increased the fracture of PI+-cell, and PI+/Ann+-cells under all culture conditions. The short-term exposure with cisplatin (24 and 48 hours) did not cause the damaging effect. Effects of cisplatin on the MMSC in the growth phase for 48 hours led to accumulation of Ann+-cells and PI+/Ann +-cells under all culture conditions. However least damaging effect of cisplatin was observed in culture under hypoxic conditions (1% O2).
Conclusion: These data suggest that monolayer MMSCs are dying primarily through necrosis, whereas MMSC in the growth phase in response to cisplatin treatment are dying by apoptosis, regardless the oxygen tension.
Цель исследования: оценить повреждающее воздействие цисплатина на ММСК жировой ткани, находящиеся в фазе активной пролиферации и в состоянии монослоя, при стандартном (20%) и сниженном до 1% и 5% уровне кислорода в среде культивирования.
Методы: Оценку влияния цисплатина на ММСК проводили на культурах 2 пассажа в состоянии монослоя и в культурах в активной фазе роста. Профиль поверхностных маркеров ММСК определяли с помощью проточной цитофлуориметрии. Жизнеспособность ММСК после инкубации с цисплатином оценивали по количеству апоптотических и некротических клеток с помощью набора ANNEXIN V-FITC – PI (Immunotech, Франция). Стандартные условия культивирования (~20% О2) создавали в СО2-инкубаторе (Sanyo, Япония), 5% О2 создавали используя мультигазовый инкубатор (Sanyo, Япония), 1% О2 – используя герметичную камеру (Stemcell Technologies, США).
Результаты: Инкубация ММСК в состоянии монослоя с цисплатином в концентрации 10 мкг/мл в течение 72 часов вызывала гибель практически половины клеток в культуре как при 20% О2, так и при 5% и 1% О2 в среде. Во всех условиях культивирования увеличивалась доля PI+-клеток и PI+/Ann+-клеток. Более кратковременные экспозиции с цисплатином (24 и 48 часов) не оказывали выраженного повреждающего эффекта. Воздействие цисплатина на ММСК в активной фазе роста в течение 48 часов сопровождалось накоплением количества Ann+-клеток и PI+/Ann+-клеток. При этом наименьшее повреждающее воздействие цисплатин оказал на клетки, культивируемые в условиях гипоксии (1% О2).
Заключение: Полученные данные свидетельствуют, что ММСК в состоянии монослоя погибают преимущественно путем некроза, тогда как для культур ММСК в фазе роста в ответ на воздействие было характерно накопление клеток, погибающих путем апоптоза, вне зависимости от уровня содержания кислорода в среде.