Отправить статью по E-mail 
Исследование сывороточной микроРНК-122 при гепатите С и ассоциированной с ним гепатоцеллюлярной карциноме
- Авторы: Ющук Н.Д.1, Малов С.И.2,3, Малов И.В.2, Дворниченко В.В.2, Расулов Р.И.4, Марш П.5, Декан Т.5,6, Мацек-Жилкова З.5,6, Степаненко Л.А.2, Огарков О.Б.7, Орлова Л.С.2
-
Учреждения:
- Московский государственный медико-стоматологический университет им. А.И. Евдокимова
- Иркутский государственный медицинский университет
- Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования ― филиал ФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Минздрава РФ
- Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования ― филиал ФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Минздрава РФ
- Институт передовых биологических наук (IAB), Университет Гренобль Альпы
- Университетский больничный центр Гренобль Альпы
- Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека
- Выпуск: Том 74, № 6 (2019)
- Страницы: 388-395
- Раздел: АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ
- Дата публикации: 21.12.2019
- URL: https://vestnikramn.spr-journal.ru/jour/article/view/1255
- DOI: https://doi.org/10.15690/vramn1255
- ID: 1255
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Обоснование. Открытие кластера коротких некодирующих РНК, получивших название микроРНК (miRNAs), стало важным событием в молекулярной биологии. Один из его представителей ― miR-122 ― играет большую роль в регуляции экспрессии генов, задействованных в углеводном, липидном обмене и метаболизме железа в организме. В экспериментальных исследованиях показано, что помимо регуляторных функций miR-122 участвует в патогенезе гепатита С, обеспечивая жизненный цикл вируса в клетке. Смещение акцентов в изучении miR-122 с фундаментальных исследований в русло клинической медицины представляется перспективным направлением персонализированной медицины.
Цель исследования ― определить клиническое значение miR-122 при остром и хроническом течении гепатита С и ассоциированной с ним гепатоцеллюлярной карциноме.
Методы. Всего было обследовано 407 человек, в том числе 17 больных острым гепатитом С, 158 ― хроническим гепатитом С и 62 ― гепатоцеллюлярной карциномой, ассоциированной с гепатитом С. Группы сравнения составили 84 практически здоровых человека и 62 больных с клинически выраженным циррозом печени неинфекционной этиологии. В каждой когорте в крови больных было проведено определение относительного уровня miR-122. Анализ осуществляли методом полимеразной цепной реакции с использованием набора реактивов Qubit microRNA Assay Kit-100 для количественного определения микроРНК (Thermo Fisher Scientific, США). Относительные значения экспрессии miR-122 были рассчитаны по формуле 2 -ΔΔCT с использованием U6 snRNA в качестве референсной РНК.
Результаты. Наиболее высокий уровень miR-122 в плазме крови был обнаружен у больных острым гепатитом С в разгар желтушного периода. Уровень miR-122 в крови коррелировал с активностью печеночных трансаминаз у больных острым (r = 0,72) и хроническим (r = 0,44) гепатитом С. Анализ уровня miR-122 относительно степени фиброза печени у больных хроническим гепатитом С показал, что по мере прогрессирования фиброза печени снижается уровень экспрессии miR-122. Снижение экспрессии miR-122 у больных с выраженным фиброзом ― циррозом печени ― носило универсальный характер и не зависело от этиологии заболевания. Развитие гепатоцеллюлярной карциномы сопровождалось падением уровня miR-122 в среднем в 10 раз по сравнению с группой больных хроническим гепатитом С.
Заключение. Определение уровня экспрессии miR-122 в крови может использоваться в лабораторном мониторинге ведения больных гепатитом С как показатель тяжести поражения печени при остром течении и скорости прогрессирования фиброза печени при хронических формах. Оценка возможности использования miR-122 в качестве предиктора развития гепатоцеллюлярной карциномы в исходе гепатита С требует проведения дополнительных исследований специфичности и чувствительности теста и сопоставления полученных данных с известными онкомаркерами протеиновой природы.
Ключевые слова
Полный текст
Обоснование
Успехи в лечении гепатита С препаратами прямого противовирусного действия позволили Всемирной организации здравоохранения сформулировать концепцию элиминации этого заболевания к 2030 г. [1]. По экспертным оценкам, обеспечение нуждающихся в лечении пациентов препаратами прямого противовирусного действия в Европе, США и некоторых странах Азии позволило снизить общее количество больных со 150 до 71 млн человек [2]. Однако необходимо учитывать, что мутации вирусного генома приводят к формированию резистентных к лечению препаратами прямого противовирусного действия штаммов [3]. Кроме этого, серьезную проблему для здравоохранения всех стран представляет рост числа больных с неблагоприятными исходами хронического гепатита С (ХГС), такими как цирроз печени и гепатоцеллюлярная карцинома (ГЦК) [4]. По мере прогрессирования фиброза печени риск развития гепатоцеллюлярной карциномы увеличивается с 2,1 до 7,8 % [5]. В определенном смысле неожиданностью было установление факта сохранения риска развития гепатоцеллюлярной карциномы у больных хроническим гепатитом С даже после достижения стойкого вирусологического ответа на противовирусную терапию [6].
Исходя из вышеперечисленного, поиск новых маркеров прогноза характера течения, скорости развития фиброза печени, риска развития ГЦК при гепатите С приобретает особую значимость. В этом направлении большие перспективы открываются в области геномики. Среди общего массива работ существенную долю занимают исследования однонуклеотидных полиморфизмов, свободно циркулирующих ДНК, эндосомальных РНК и их значения в патогенезе различных заболеваний [7]. Открытие в 2002 г. микроРНК-122 (miR-122) стало событием в гепатологии благодаря функциональным особенностям этого кластера РНК [8]. Участие miR-122 в жизненном цикле вируса гепатита С (hepatitis C virus, HCV) не оставляет сомнений в перспективности использования ее количественного определения в крови для диагностических целей [9]. В подавляющем большинстве работ представлены исследования miR-122 в отдельных когортах больных с разнообразной патологией печени: хронический гепатит В и С, гепатоцеллюлярная карцинома, неалкогольная жировая болезнь печени [9−12]. К сожалению, эти данные трудно сопоставимы, так как в указанных исследованиях использованы различные референтные РНК, а результаты определения miR-122 нормализованы по отношению к различным контрольным группам (здоровые люди, больные хроническим гепатитом, больные с уровнем фиброза F0 по шкале METAVIR и т.д.). Вместе с тем представляется важным сравнительный анализ уровня miR-122 при гепатите С на различных этапах развития инфекционного процесса ― от острого инфицирования через стадию хронического течения к развитию цирроза печени и ГЦК.
Цель исследования ― определить клиническое значение miR-122 при остром и хроническом течении гепатита С и ассоциированной с ним гепатоцеллюлярной карциноме.
Методы
Дизайн исследования
Проведено одномоментное многоцентровое выборочное неконтролируемое сравнительное исследование типа «случай-контроль» в параллельных группах пациентов с острым гепатитом С (ОГС), хроническим гепатитом С с различной степенью фиброза печени, циррозом печени неинфекционной этиологии, гепатоцеллюлярной карциномой и здоровых добровольцев.
Критерии соответствия
Для анализа среднего относительного уровня miR-122 в плазме крови были сформированы 3 группы больных гепатитом С и 2 контрольные группы. Группы больных включали 17 пациентов с острым, 158 — с хроническим гепатитом С и 86 больных гепатоцеллюлярным раком, развившимся на фоне хронического гепатита С. Контрольные группы состояли из 84 практически здоровых лиц и 62 больных циррозом печени неинфекционной этиологии.
Критерии включения: взрослые лица, больные острым и хроническим гепатитом С, а также ГЦК, ассоциированной с HCV.
Больные хроническим гепатитом С по степени фиброза были разделены на группы больных с минимальным фиброзом печени (F0−F1 по шкале METAVIR) и с выраженным фиброзом печени (F4 по шкале METAVIR). Для включения в исследование у всех больных, а также у здоровых лиц проводились анализы на наличие антител к HCV (анти-HCV) и HBsAg. При наличии анти-HCV проводили определение РНК HCV в крови методом полимеразной цепной реакции. Амплификацию осуществляли на амплификаторе Rotor Gene Q (Qiagen, Германия) с использованием праймеров и реактивов производства ФБУН «ЦНИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора. Определение генотипа HCV осуществляли с помощью набора реагентов «АмплиСенс HCV-Генотип-FL» или «АмплиСенс HСV-1/2/3-FL» (ФБУН «ЦНИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора, Россия).
Диагнозы устанавливали в соответствии с российскими рекомендациями по диагностике и лечению взрослых больных гепатитами В и С [13]. Диагноз хронического гепатита С устанавливали на основании данных анамнеза, клинического обследования, определения активности печеночных трансаминаз, анти-HCV IgG и РНК HCV. Острый гепатит С характеризовался желтушностью кожных покровов, иктеричностью склер, наличием преджелтушного периода, протекающего по диспепсическому или астеновегетативному варианту, а также субфебрилитетом, увеличением печени и селезенки. Наибольшее значение в диагностике ОГС имели лабораторные данные: повышение уровня аланинаминотрансферазы (АЛТ более 10 норм) и общего билирубина. У всех больных были выявлены суммарные anti-HCV, антитела к NS-антигенам HCV и РНК HCV в крови. Цирроз печени был диагностирован на основании клинико-лабораторных данных, эластометрии печени, результатов ультразвукового исследования. При необходимости выполнялась компьютерная или магнитно-резонансная томография печени. Диагноз гепатоцеллюлярной карциномы устанавливался с учетом критериев Европейской ассоциации по изучению болезней печени (European Association for the Study of the Liver, ЕASL) [14]. У всех больных диагноз был верифицирован морфологически. Степень фиброза печени у больных ХГС определяли с помощью аппарата FibroScan-502 (Франция). Степень фиброза F0−F1 по шкале METAVIR соответствовала диапазону эластичности печеночной ткани 1,5−7,2 кПа, F4 ― 12,6−75,0 кПа.
Критерии исключения: наличие сопутствующей патологии печени другой этиологии (гепатит В, болезнь Вильсона−Коновалова, аутоиммунный гепатит, наследственный гемохроматоз, алкогольная болезнь печени, токсический гепатит), ВИЧ-инфекция, гепатоцеллюлярная карцинома в терминальной стадии (IV по классификации TNM), отказ от подписания информированного согласия.
Условия проведения
Работа проводилась на базе Иркутской областной инфекционной клинической больницы, Иркутского областного клинического консультативно-диагностического центра и областного онкологического диспансера (Иркутск). Лабораторные исследования по определению miR-122 в 2018 г. выполнялись в Институте передовых биологических наук Университета Гренобль Альпы (Франция), в 2019 г. ― в Научно-исследовательском институте биомедицинских исследований Иркутского государственного медицинского университета (Российская Федерация). При выполнении работы авторы руководствовались этическими принципами Хельсинкской декларации Всемирной медицинской организации [15].
Продолжительность исследования
Исследование проводили с апреля 2018 по сентябрь 2019 г.
Описание медицинского вмешательства и анализ в подгруппах
Для получения плазмы кровь собиралась натощак из локтевой вены одноразовой иглой в вакуумную пробирку типа Vacuett. Образцы плазмы пациентов с ОГС были собраны во время госпитализации в острый желтушный период болезни, у больных ХГС и гепатоцеллюлярной карциномой ― во время диспансерного наблюдения. Кровь центрифугировали, затем отбирали плазму в количестве не менее 500 мкл отдельными наконечниками с аэрозольным барьером в стерильные пробирки объемом 1,5 мл и замораживали при -74…-76 °С.
Исходы исследования
Определение относительного уровня экспрессии miR-122 в крови больных острым, хроническим гепатитом С, циррозом печени и ГЦК.
Методы регистрации исходов
Выделение общей РНК из плазмы крови, содержащей фракцию зрелых микроРНК, проводили с использованием набора «Рибо-преп-100» (ФБУН «ЦНИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора, Россия) в соответствии с протоколом фирмы-производителя. Количественное определение выделенной РНК осуществляли на флуориметре Qubit-4™ (Invitrogen, США) с использованием набора реактивов Qubit microRNA Assay Kit-100 для количественного определения микроРНК (5−100 нг) (Thermo Fisher Scientific, США) согласно протоколу производителя. Расчет концентрации РНК в пробе производился автоматически с помощью калибровочной кривой. Выход «чистой» РНК составлял от 0,5 до 30 мкг/ мл. Реакция обратной транскрипции осуществлялась с использованием набора MMLV RT kit (Евроген, Россия) для синтеза кДНК на РНК-матрице и «stem-loop»-праймеров (20 мкМ) к определенным микроРНК-hsa-miR-122, U6snRNA (TaqMan microRNA Assays, Thermo Fisher Scientific, США). Среднее значение относительного уровня miR-122 определяли после проведения полимеразной цепной реакции в двух экземплярах для каждого образца в режиме реального времени на приборе Rotor-Gene Q (Qiagen, Германия). Относительные значения экспрессии miR-122 были рассчитаны по формуле 2 -ΔΔCT с использованием U6 snRNA в качестве референсной РНК [16]. Результаты ΔCT = miR122 Ct - U6 Ct были нормализованы по отношению к группе здоровых лиц. Результаты определения miR-122 в группах представляли в относительных единицах как среднюю арифметическую величину и ошибку средней арифметической.
Этическая экспертиза
Информированное согласие было получено от каждого участника исследования, а план проведения и дизайн настоящей работы были одобрены комитетом по этике Иркутского государственного медицинского университета (протокол № 4 от 06.04.2018).
Статистический анализ
Размер выборки предварительно не рассчитывался. Для анализа различий между группами были использованы критерии Манна−Уитни (U) и хи-квадрат (χ2). Коэффициент корреляции (r) использовали для оценки корреляции между уровнем экспрессии miRNA-122 и активностью печеночных трансаминаз. Все данные были статистически обработаны с использованием программы Epidemiology/Biostatistics Tools для Windows (Wayne W. LaMorte, MD, PhD, MPH Copyright 2006; США). Уровень статистической значимости был принят при р ≤ 0,05 в двустороннем t-тесте.
Результаты
Объекты (участники) исследования
Всего было обследовано 407 человек в возрасте от 18 лет до 81 года. В общей выборке доля мужчин составила 228 (56,0 %), женщин ― 179 (44,0 %). Клинико-лабораторная характеристика лиц, включенных в исследование, представлена в табл. 1.
Таблица 1. Клинико-лабораторная характеристика обследованных лиц
Показатель | ОГС | ХГС (F0−F1) | ХГС (F4) | ГЦК | ЦПНЭ | Здоровые лица |
Число наблюдений | 17 | 100 | 58 | 86 | 62 | 84 |
Возраст, лет | 38,1 ± 6,0 | 43,3 ± 3,0 | 57,7 ± 10,5 | 61,7 ± 12,1 | 59,9 ± 4,5 | 41,7 ± 3,2 |
Пол, муж., % | 9 (52,9 ± 12,1) | 44 (44,0 ± 5,0) | 37 (63,8 ± 6,3) | 53 (61,6 ± 5,2) | 42 (67,7 ± 5,9) | 43 (51,2 ± 5,5) |
ИМТ | 24,7 ± 2,2 | 26,5 ± 1,4 | 25,1 ± 1,1 | 26,5 ± 1,3 | 25,5 ± 1,1 | 24,4 ± 1,3 |
Билирубин при первом обращении, мкмоль/л | 153,5+15,7 | 15,0 ± 0,55 | 27,2 ± 8,6 | 47,9 ± 18,7 | 118,6 ± 20,8 | - |
АЛТ при первом обращении, Ед/л | 1535,3 ± 110,8 | 78,7 ± 4,3 | 65,5 ± 10,9 | 76,6 ± 33,8 | 39,9 ± 22,6 | - |
АСТ при первом обращении, Ед/л | 1009,6 ± 107,9 | 59,0 ± 2,9 | 88,0 ± 9,8 | 98,5 ± 40,1 | 44,5 ± 36,4 | - |
Анти-HCV «+», абс. (%) | 17 (100) | 100 (100) | 58 (100) | 86 (100) | 0 (0) | 0 (0) |
ПЦР гепатит С «+», абс. (%) | 17 (100) | 100 | 58 | 67 (77,9) | - | - |
Генотип HCV 1/2/3, % | 52,9 / 5,9 / 41,2 | 53,0 / 7,0 / 40,0 | 53,4 / 6,9 / 39,7 | 62,7 / 7,5 / 29,8 | - | - |
Альбумин, г/л | 39,1 ± 3,2 | 42,1 ± 1,2 | 32,0 ± 4,0 | 28,9 ± 1,3 | 26,9 ± 0,79 | - |
AFP, нг/мл | - | 5,0 ± 0,2 | 6,7 ± 1,7 | 458,3 ± 271,2 | 4,7 ± 0,2 | |
TNM, стадия I, n (%) | - | - | - | 45 (52,3 ± 5,4) | - | - |
TNM, стадия II, n (%) | - | - | - | 28 (32,6 ± 5,1) | - | - |
TNM, стадия IIIА, n (%) | - | - | - | 13 (15,1 ± 3,9) | - | - |
Примечание. ОГС ― острый гепатит С, ХГС ― хронический гепатит С, ГЦК ― гепатоцеллюлярная карцинома, ЦПНЭ ― цирроз печени неинфекционной этиологии, ИМТ ― индекс массы тела, АЛТ ― аланинаминотрансфераза, АСТ ― аспартатаминотрансфераза, HCV (от hepatitis C virus) ― вирус гепатита С, ПЦР ― метод полимеразной цепной реакции, AFP (от alpha-fetoprotein) ― альфа-фетопротеин, TNM (от tumor, nodus и metastasis) ― международная классификация стадий злокачественных новообразований.
Основные результаты исследования
Средний уровень miR-122 существенно отличался в исследуемых когортах (табл. 2).
Таблица 2. Значимость различий (р) среднего относительного уровня (Мср ± m) miR-122 (ОЕ) в крови больных в исследуемых когортах
Группа | ОГС | ХГС (F0–F1) | ХГС (F4) | Цирроз печени | ГЦК | Здоровые люди (контроль) |
34,6 ± 3,59 | 3,4 ± 0,39 | 2,1 ± 0,42 | 1,9 ± 0,35 | 0,36 ± 0,06 | 1,03 ± 0,08 | |
ОГС | - | < 0,001 | < 0,001 | < 0,001 | < 0,001 | < 0,001 |
ХГС (F0−F1) | - | - | < 0,05 | < 0,01 | < 0,001 | < 0,001 |
ХГС (F4) | - | - | - | >0,05 | < 0,001 | < 0,05 |
Цирроз печени | - | - | - | - | < 0,001 | < 0,05 |
ГЦК | - | - | - | - | - | < 0,001 |
Примечание. ОГС ― острый гепатит С, ХГС ― хронический гепатит С, ГЦК ― гепатоцеллюлярная карцинома.
Наиболее высокий уровень miR-122 в плазме крови был обнаружен у больных ОГС в разгар желтушного периода. Уровень miR-122 показал прямую корреляцию с активностью печеночных трансаминаз у больных острым и хроническим гепатитом С с более высоким коэффициентом корреляции при остром течении гепатита (рис. 1, 2). При формировании хронического течения экспрессия miR-122 значительно снижалась, но оставалась значимо выше, чем у здоровых лиц. Развитие ГЦК на фоне хронического гепатита С сопровождалось падением уровня miR-122 в 100 раз по сравнению с больными ОГС и в 10 раз по сравнению с больными ХГС (рис. 3). Не было обнаружено отличий между уровнем miR-122 у больных с ранней (I по классификации TNM) и продвинутой (II−III по классификации TNM) стадией ГЦК: 0,39 + 0,06 и 0,33 + 0,06 ОЕ соответственно, p > 0,05. Анализ уровня miR-122 относительно данных эластометрии у больных ХГС показал, что по мере прогрессирования фиброза печени снижается уровень экспрессии miR-122 (рис. 4). Однако даже в продвинутой стадии фиброза печени и у больных с клиническими проявлениями цирроза печени уровень miR-122 оставался более высоким, чем у здоровых лиц. Снижение экспрессии miR-122 у больных циррозом печени носило универсальный характер и не зависело от его этиологии.
Рис. 1. Корреляция активности аланинаминотрансферазы (АЛТ) с уровнем miR-122 крови при остром гепатите С (n = 17)
Рис. 2. Корреляция активности аланинаминотрансферазы (АЛТ) с уровнем miR-122 крови при хроническом гепатите С (n = 17)
Рис. 3. Изменение уровня miR-122 в процессе прогрессирования фиброза и трансформации хронического гепатита С (ХГС) в гепатоцеллюлярную карциному (ГЦК)
Рис. 4. Уровень miR-122 в зависимости от степени фиброза печени у больных хроническим гепатитом С (ХГС) и циррозом печени неинфекционной этиологии
Обсуждение
Как известно, основные биологические функции микроРНК ― транскрипционная и посттранскрипционная регуляция экспрессии генов, в том числе блокада трансляции мРНК [9]. В отличие от других кластеров, miR-122, помимо участия в регуляции липидного и углеводного обмена, играет большую роль в обеспечении жизненного цикла HCV [17]. Комплементарная связь двух молекул miR-122 с 5’-нетранслируемой зоной РНК HCV обеспечивает экранирование последней, предупреждает ее распознавание внутриклеточными паттернраспознающими рецепторами и помогает избежать деградации под влиянием внутриклеточных эндонуклеаз [18]. Снижение уровня miR-122 путем ее связывания антисмысловой РНК приводит к ответному снижению уровня вирусной РНК, вплоть до полной авиремии [19].
MiR-122 обладает выраженной органоспецифичностью и сосредоточена преимущественно в клетках печени [18]. Обнаруженное в настоящей работе в острый желтушный период болезни существенное повышение уровня miR-122 в крови, по-видимому, отражает цитолиз гепатоцитов. Ранее было предложено использовать miR-122 как неинвазивный показатель поражения печени любой этиологии [20−22]. По нашим данным, в сравнении со здоровыми лицами уровень miR-122 при развитии острого гепатита повышается в среднем в 35 раз. Степень повышения печеночных трансаминаз также отражает интенсивность цитолиза, что широко используется в практической медицине. Именно поэтому наличие корреляции между miR-122 и АЛТ вполне ожидаемо. Однако коэффициент корреляции оказался выше при остром гепатите С. Таким образом, уровень miR-122 наряду с биохимическими маркерами может быть индикатором цитолитического синдрома, особенно при остром поражении печени.
Зависимость между уровнем miR-122 и степенью фиброза печени была отмечена ранее [23, 24]. В настоящей работе такая закономерность была подтверждена для категории больных гепатитом С, что, очевидно, обусловлено замещением массы функционирующих гепатоцитов соединительной тканью, не содержащей miR-122. Не обнаружено отличий между относительными показателями miR-122 у больных ХГС с F4-фиброзом и у больных с клинически выраженным циррозом печени неинфекционной этиологии. Снижение уровня miR-122 описано также при выраженном фиброзе печени на фоне хронического гепатита В, неалкогольном стеатогепатите и аутоиммунном гепатите [9, 25]. На основании этого можно утверждать, что по уровню miR-122, исследованному в динамике, можно судить о скорости прогрессирования фиброза печени. Это особенно актуально для больных с ожирением, наличием асцита и острого воспаления, когда инструментальная эластометрия неинформативна.
В последние годы особое значение придается miR-122 как диагностическому маркеру гепатоцеллюлярной карциномы [26]. В этом направлении выполнено большое число работ, которые касаются оценки miR-122 как в качестве самостоятельного онкомаркера, так и в сочетании с микроРНК других кластеров или белковыми молекулами [12, 26, 27]. Однако на этом пути существует ряд трудностей.
Как было показано выше, на определенном этапе канцерогенеза происходит снижение уровня miR-122 в крови больных. Сначала уровень miR-122 у больных ГЦК достигает среднего значения такового у здоровых лиц. В последующем на фоне прогрессирования рака печени происходит дальнейшее снижение уровня miR-122 в крови, характеризующееся в средних показателях как 1/3 его уровня у здоровых лиц. Таким образом, использование в качестве контроля уровня miR-122 у здоровых лиц может оказаться неинформативным на ранних стадиях развития опухоли. К сожалению, в условиях одномоментного ретроспективного исследования не удалось установить зависимость между стадией развития опухоли и уровнем снижения miR-122 в крови. Соответственно, не был определен диагностически значимый уровень снижения miR-122 как по отношению к показателям здоровых лиц, так и больных ХГС. Для этого необходимо проведение проспективного наблюдения за больными ХГС в процессе развития ГЦК с оценкой уровня miR-122 в динамике канцерогенеза и сопоставления значимости этого показателя с известными онкомаркерами.
Еще одним серьезным препятствием применения miR-122 в диагностических целях является высокая вариабельность сывороточного уровня этого маркера у здоровых людей. J. Vogt и соавт. (2019) [28] показаны существенные отличия в уровне miR-122 у здоровых лиц в зависимости от пола, возраста, этнической принадлежности. Кроме этого, необходимо учитывать недавно полученные данные о зависимости уровня miR-122 от генетической вариабельности сайтов гена MIR-122 [29]. Установлено, что у носителей СС-генотипа rs1135519 однонуклеотидного полиморфизма в зоне около гена MIR-122 экспрессия miR-122 в гепатоцитах существенно выше, чем у носителей ТТ-генотипа [29], что создает трудности в определении общего диагностического порога. Таким образом, по результатам проведенных исследований можно утверждать, что miR-122 может применяться в лабораторном мониторинге ведения больных гепатитом С как показатель тяжести поражения печени при остром гепатите С и скорости формирования фиброза печени при хроническом. Оценка возможности использования miR-122 в качестве предиктора развития гепатоцеллюлярной карциномы в исходе гепатита С требует проведения дополнительных исследований специфичности и чувствительности и сопоставления полученных данных с известными онкомаркерами протеиновой природы.
Заключение
Определение относительного количества miR-122 в крови отражает активность воспалительного процесса в печени, поэтому может служить критерием тяжести течения гепатита. Уровень miR-122 снижается в крови по мере прогрессирования фиброза печени и достигает минимальных значений при развитии цирроза печени. Снижение уровня miR-122 носит неспецифический характер и наблюдается как при вирусном, так и неинфекционном генезе цирроза. Развитие гепатоцеллюлярной карциномы сопровождается еще более выраженным, чем при циррозе печени, угнетением экспрессии miR-122, что делает эту молекулу перспективной в качестве прогностического онкомаркера. Но вместе с тем в настоящее время существует ряд серьезных трудностей, препятствующих использованию miR-122 как диагностического инструмента. Необходимы дополнительные проспективные исследования специфичности и чувствительности определения miR-122 для диагностики гепатоцеллюлярной карциномы с учетом факторов, влияющих на экспрессию и транспорт miR-122 в клетке.
Дополнительная информация
Источник финансирования. Исследование выполнено при финансовой поддержке Федеральной целевой программы проведения исследований по приоритетным направлениям с участием научно-исследовательских организаций и университетов в рамках российско-французской Партнерской программы Юбера Кюрьена «Колмогоров» (контракт № 14.616.21.0098; уникальный идентификационный номер проекта RFMEFI61618X0098).
Конфликт интересов. Авторы данной статьи подтвердили отсутствие конфликта интересов, о котором необходимо сообщить.
Участие авторов. Н.Д. Ющук ― разработка общей концепции и дизайна исследования; С.И. Малов ― анализ клинико-лабораторных данных, подготовка графического материала, написание текста; И.В. Малов ― обзор литературы, написание и редактирование текста; В.В. Дворниченко, Р.И. Расулов ― сбор биоматериала от больных гепатоцеллюлярной карциномой, анализ первичной медицинской документации; П.Н. Марш ― разработка дизайна исследования; Т. Декан, З. Мацек-Жилкова ― выполнение лабораторных исследований на территории Франции; Л.А. Степаненко ― освоение методики, выполнение лабораторных исследований на территории России; О.Б. Огарков ― статистический анализ результатов лабораторных исследований; Л.С. Орлова ― сбор биоматериала от здоровых лиц, от больных гепатитом С, анализ первичной медицинской документации. Все авторы приняли активное участие в выполнении работы, прочли, внесли правки и одобрили окончательную версию статьи.
Об авторах
Николай Дмитриевич Ющук
Московский государственный медико-стоматологический университет им. А.И. Евдокимова
Email: prof.uyshuk@gmail.com
ORCID iD: 0000-0003-1928-4747
SPIN-код: 8547-6651
д.м.н., профессор, академик РАН
Россия, 127473, г. Москва, ул. Делегатская, д. 20/1Сергей Игоревич Малов
Иркутский государственный медицинский университет; Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования ― филиал ФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Минздрава РФ
Автор, ответственный за переписку.
Email: LYNX2000@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-3135-4616
SPIN-код: 5050-3112
к.м.н.
Россия, 664003, г. Иркустк, ул. Красного Восстания, д.1; 664049, г.Иркутск, м/р Юбилейный,100Игорь Владимирович Малов
Иркутский государственный медицинский университет
Email: igmumalov@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-0122-4618
SPIN-код: 8302-3057
д.м.н., профессор
Россия, 664003, г. Иркустк, ул. Красного Восстания, д.1Виктория Владимировна Дворниченко
Иркутский государственный медицинский университет
Email: vv.dvornichenko@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-1777-5449
SPIN-код: 9628-8656
д.м.н., профессор
Россия, 664003, г. Иркустк, ул. Красного Восстания, д.1Родион Исмагилович Расулов
Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования ― филиал ФГБОУ ДПО«Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Минздрава РФ
Email: gava2010@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-3671-1459
SPIN-код: 3520-6049
д.м.н., профессор
Россия, 664049, г.Иркутск, м/р Юбилейный,100Патрис Н. Марш
Институт передовых биологических наук (IAB), Университет Гренобль Альпы
Email: patrice.marche@inserm.fr
ORCID iD: 0000-0002-8930-9340
профессор
Франция, Ля ТроншТома Декан
Институт передовых биологических наук (IAB), Университет Гренобль Альпы; Университетский больничный центр Гренобль Альпы
Email: tdecaens@chu-grenoble.fr
ORCID iD: 0000-0003-0928-0048
профессор отделение гепатогастроэнтерологии
Франция, Ля ТроншЗюзана Мацек-Жилкова
Институт передовых биологических наук (IAB), Университет Гренобль Альпы; Университетский больничный центр Гренобль Альпы
Email: zuzana.mjilkova@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-2553-5971
профессор отделение гепатогастроэнтерологии
Франция, Ля ТроншЛилия Александровна Степаненко
Иркутский государственный медицинский университет
Email: steplia@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-5792-7283
SPIN-код: 1148-6958
к.м.н.
Россия, 664003, г. Иркустк, ул. Красного Восстания, д.1Олег Борисович Огарков
Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека
Email: obogarkov@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-3168-1983
SPIN-код: 1956-2888
д.м.н.
Россия, 664003, г. Иркутск, ул. Тимирязева, 16Лариса Сергеевна Орлова
Иркутский государственный медицинский университет
Email: orlovalarisas@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-2248-6940
SPIN-код: 7538-0290
к.м.н.
Россия, 664003, г. Иркутск, ул. Тимирязева, 16Список литературы
- World Health Organization. Media centre. Sixty-ninth World Health Assembly closes [Internet]. WHO; 2019 [cited 2016 May]. Available from: http://www.who.int/mediacentre/events/2016/wha69/en.
- World Health Organization. Hepatitis. Global hepatitis report 2017 [Internet]. WHO; 2019 [cited 2017 April]. Available from: https://www.who.int/hepatitis/publications/global-hepatitis-report2017/en/.
- Sharafi H, Alavian SM. Hepatitis C resistance to NS5A inhibitors: is it going to be a problem? World J Hepatol. 2018;10(9):543−548. doi: 10.4254/wjh.v10.i9.543.
- Пименов Н.Н., Комарова С.В., Карандашова И.В., и др. Гепатит С и его исходы в России: анализ заболеваемости распространенности и смертности до начала программы элиминации инфекции // Инфекционные болезни. ― 2018. ― Т.16. ― №3. ― С. 37−45. [Pimenov NN, Komarova SV, Karandashova IV, et al. Hepatitis С and its outcomes in Russia: analysis of incidence, prevalence and mortality rates before the start of the programme of infection elimination. Infectious diseases. 2018;16(3):37−45. (In Russ).] doi: 10.20953/1729-9225-2018-3-37-45.
- Calvaruso V, Cabibbo G, Cacciola I, et al. Incidence of hepatocellular carcinoma in patients with HCV-associated cirrhosis treated with direct-acting antiviral agents. Gastroenterology. 2018;155(2):411−421. doi: 10.1053/j.gastro.2018.04.008.
- Liu X, Gao Y, Niu J. Hepatitis C virus ― related hepatocellular carcinoma in the era of direct ― acting antiviral agents. Hepat Mon. 2018;18(6):e66007. doi: 10.5812/hepatmon.66007.
- Sohn W, Kim J, Kang SH, et al. Serum exosomal microRNAs as novel biomarkers for hepatocellular carcinoma. Exp Mol Med. 2015;47:e184. doi: 10.1038/emm.2015.68.
- Lagos-Quintana M, Rauhut R, Yalcin A, et al. Identification of tissue-specific microRNAs from mouse. Curr Biol. 2002;12(9):735–739. doi: 10.1016/s0960-9822(02)00809-6.
- Thakral S, Ghoshal K. MiR-122 is a unique molecule with great potential in diagnosis, prognosis of liver disease, and therapy both as miRNA mimic and antimir. Curr Gene Ther. 2015;15(2):142−150. doi: 10.2174/1566523214666141224095610.
- Gholamia M, Ravanshada M, Alavian SM, et al. Evaluation of miR-122 level in the plasma of chronically HCV infected patients. Mol Biol. 2016;50(2):242−245. doi: 10.7868/S0026898416020075.
- Mahmoudian-Sani MR, Asgharzade S, Alghasi A, et al. MicroRNA-122 in patients with hepatitis B and hepatitis B virus-associated hepatocellular carcinoma. J Gastrointest Oncol. 2019;10(4):789−796. doi: 10.21037/jgo.2019.02.14.
- Zhang Y, Li Y, Jiang W, et al. The clinical significance of microRNA-122 in predicting the prognosis of patients with hepatocellular carcinoma. Medicine. 2019;98(13):e14810. doi: 10.1097/MD.0000000000014810.
- Рекомендации по диагностике и лечению взрослых больных гепатитами В и С. / Под ред. В.Т. Ивашкина, Н.Д. Ющука. ― М.: ГЭОТАР-Медиа, 2015. ― 144 с. [Rekomendatsii po diagnostike i lecheniiu vzroslykh bol’nykh gepatitami B i C: Klinicheskie rekomendatsii. Ed by VT Ivashkin, ND Yushchuk. Moscow: GEOTAR-Media; 2015. 144 p. (In Russ).]
- EASL Clinical Practice Guidelines: Management of hepatocellular carcinoma. J Hepatol. 2018;69(1):182−236. doi: 10.1016/j.jhep.2018.03.019.
- World Medical Association. World Medical Association Declaration of Helsinki: ethical principles for medical research involving human subject. JAMA. 2013;310(20):2191−2194. doi: 10.1001/jama.2013.281053.
- Livak KJ, Schmittgen TD. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method. Methods. 2001;25 (4):402−408. doi: 10.1006/meth.2001.1262.
- Murayama A, Sugiyama N, Wakita T, Kato T. Completion of the entire hepatitis C virus life cycle in vero cells derived from monkey kidney. Mbio. 2016;7(3). pii: e00273-16. doi: 10.1128/mBio.00273-16.
- Sedano CD, Sarnow P. Interaction of host cell microRNAs with the HCV RNA genome during infection of liver cells. Semin Liver Dis. 2015;35(1):75−80. doi: 10.1055/s-0034-1397351.
- Van der Ree MH, de Vree JM, Stelma F, et al. Safety, tolerability, and antiviral effect of RG-101 in patients with chronic hepatitis C: a phase 1B, double-blind, randomised controlled trial. Lancet. 2017;389(10070):709−717. doi: 10.1016/S0140-6736(16)31715-9.
- Kumar S, Chawla YK, Ghosh S, Chakraborti A. Severity of hepatitis C virus (genotype-3) infection positively correlates with circulating MicroRNA-122 in patients sera. Dis Markers. 2014;2014:435476. doi: 10.1155/2014/435476.
- Xu P, Guo A, Xu J, et al. Evaluation of a combinational use of serum microRNAs as biomarkers for liver diseases. Clin Res Hepatol Gastroenterol. 2017;41(3):254−261. doi: 10.1016/j.clinre.2016.10.013.
- Musaddaq G, Shahzad N, Ashraf MA, Arshad M.I. Circulating liver-specific micrornas as a noninvasive diagnostic biomarkers of hepatic diseases in human. Biomarkers. 2019;24(2):103−109. doi: 10.1080/1354750X.2018.1528631.
- Halász T, Horváth G, Pár G, et al. miR-122 negatively correlates with liver fibrosis as detected by histology and FibroScan. World J Gastroenterol. 2015;21(25):7814−7823. doi: 10.3748/wjg.v21.i25.7814.
- Trebicka J, Anadol E, Elfimova N, et al. Hepatic and serum levels of miR-122 after chronic HCV-induced fibrosis. J Hepatol. 2013;58(2):234−239. doi: 10.1016/j.jhep.2012.10.015.
- Zhou X, Fang S, Wang M, et al. Diagnostic value of circulating miRNA⁃122 for hepatitis B virus and/or hepatitis C virus-associated chronic viral hepatitis. Biosci Rep. 2019;39(9). pii: BSR20190900. doi: 10.1042/BSR20190900.
- Bharali D, Banerjee BD, Bharadwaj M, et al. Expression analysis of microRNA-21 and microRNA-122 in hepatocellular carcinoma. J Clin Exp Hepatol. 2019;9(3):294−301. doi: 10.1016/j.jceh.2018.07.005.
- Sartorius K, Sartorius B. Circulating microRNA’s as a diagnostic tool for hepatocellular carcinoma in a hyper endemic HIV setting, KwaZulu-Natal, South Africa: a case control study protocol focusing on viral etiology. BMC Cancer. 2017;17(1):894. doi: 10.1186/s12885-017-3915-z.
- Vogt J, Sheinson D, Katavolos P, et al. Variance component analysis of circulating miR-122 in serum from healthy human volunteers. PLoS One. 2019;14(7):e0220406. doi: 10.1371/journal.pone.0220406.
- Bei C, Liu S, Yu X, et al. Single nucleotide polymorphisms in miR-122 are associated with the risk of hepatocellular carcinoma in a southern chinese population. Biomed Res Int. 2018;2018:1540201. doi: 10.1155/2018/1540201.
Дополнительные файлы
